细胞与分子免疫学杂志

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甲基转移酶样蛋白3(METTL3)通过NF-κB信号通路促进小鼠巨噬细胞活化和炎症反应

作者:

张天择1, 陈旭1, 王微1, 席文锦1, 霍毅1, 2, 杨安钢1*, 王涛3*(1空军军医大学基础医学院免疫学教研室, 陕西 西安 710032; 2解放军第四医院, 青海 西宁 810014; 3空军军医大学基础医学院医学遗传与发育生物学教研室, 陕西 西安 710032)

出版年,卷期:

2019 第(35)卷 第(8)期 起止页码 727-732 页

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摘要:

目的 研究参与腺嘌呤第6位氮原子上的甲基化修饰(m6A)的甲基转移酶样蛋白3(METTL3)在巨噬细胞活化中的作用。方法 体外培养小鼠RAW264.7巨噬细胞, 并以1 μg/mL 脂多糖(LPS) 刺激0、 2、 4、 6 h, 检测METTL3 的表达情况。设计合成的针对小鼠 METTL3 的 小干扰RNA(siRNA)敲低METTL3的表达, 通过实时定量 PCR 和 Western blot 法检测干扰效率; 利用 siRNA 下调 METTL3 表达 48 h 后, 以1 μg/mL LPS 刺激 RAW264.7细胞, 采用实时定量PCR检测白细胞介素 6 (IL-6)、 肿瘤坏死因子α (TNF-α)、 IL-12、  IL-1β的 mRNA 水平, Western blot法检测核因子κB (NF-κB) 信号通路中p65和磷酸化p65 蛋白水平。结果 LPS 刺激后RAW264.7 细胞METTL3 的表达上调, 设计合成的METTL3 siRNA能有效敲低METTL3的水平。敲低 METTL3后, 巨噬细胞LPS 刺激诱导表达的IL-6、 IL-12、 TNF-α 和 IL-1β显著降低, 同时伴有NF-κВ信号通路p65蛋白的磷酸化水平降低。结论 METTL3通过激活NF-κВ信号通路促进 LPS 刺激的巨噬细胞活化和炎症反应。