细胞与分子免疫学杂志

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改构人源化免疫促凋亡蛋白的表达及对HER2阳性肿瘤细胞的特异杀伤作用

作者:

杨甜1, 张仪婷2, 陈园坤3, 王鹏举3, 赵晶2, 杨安钢1*, 阎博2*(空军军医大学基础医学院: 1免疫学教研室, 2生物化学与分子生物学教研室, 陕西 西安 710032; 3新乡医学院检验学院, 河南 新乡 453000)

出版年,卷期:

2019 第(35)卷 第(12)期 起止页码 1109-1114 页

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摘要:

目的 哺乳动物细胞表达切割位点改构的人源化免疫促凋亡蛋白, 验证其对人表皮生长因子受体2(HER2)阳性肿瘤细胞的杀伤作用。方法 将Kozak序列、 人源化抗HER2单链抗体P1h3、 Fc标签、 组织蛋白酶D切割位点D1和促凋亡效应分子tBid基因依次连接, 克隆入真核表达载体pLVX-EGFP; 转染HEK293F细胞, Western blot法鉴定培养上清中目的蛋白的分泌表达; 通过显微镜观察计数和萤光素酶活性检测法, 验证目的蛋白对HER2阳性PC9肺癌细胞的杀伤作用。结果 成功构建真核表达载体pLVX-P1h3-Fc-D1-tBid-EGFP; 转染HEK293F细胞后, Western blot结果证明培养上清中有目的蛋白表达; 杀伤实验结果显示目的蛋白可以显著诱导HER2阳性PC9细胞死亡。结论 哺乳动物细胞表达的改构人源化免疫促凋亡分子可以特异性杀伤HER2阳性肿瘤细胞。