细胞与分子免疫学杂志

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利用Cre-loxP系统研究细胞间mRNA的传递

作者:

王梦雪1, 韩小松2, 倪超2*, 王小宁1, 3*(1新乡医学院精神神经医学研究院, 河南 新乡 453000; 2复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室, 上海 200438; 3中国人民解放军总医院老年医学研究所, 北京 100853)

出版年,卷期:

2020 第(36)卷 第(9)期 起止页码 769-775 页

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摘要:

目的 利用Cre-loxP重组酶系统研究mRNA在细胞间传递过程及意义。方法 构建和筛选稳定表达Cre重组酶的供体细胞及稳定表达loxP-DsRed-loxP-eGFP的受体细胞。将供、 受体细胞共培养或在TranswellTM中共培养,  设置单独受体细胞组为对照,  72 h后观察统计各组受体细胞eGFP阳性率,  利用细胞免疫荧光细胞染色检测eGFP阳性细胞中Cre表达情况,  并探讨供体细胞死亡、 细胞膜纳米管、 Rho相关激酶(ROCK)信号通路对Cre mRNA传递的影响。结果 将供、 受体细胞共培养72 h后发现,  共培养组eGFP为阳性,  单独受体细胞组、 TranswellTM共培养组eGFP均为阴性,  表明细胞接触可以介导Cre mRNA传递,  免疫荧光染色结果显示Cre蛋白可在受体细胞中翻译和入核。此外,  Cre mRNA的传递主要通过活细胞,  而膜纳米管及ROCK信号通路抑制剂可部分阻滞该过程。结论 mRNA可以通过细胞间接触在活细胞中传递,  进入受体细胞后还可翻译成蛋白质发挥生物学功能。