细胞与分子免疫学杂志

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脂多糖/氨基半乳糖(LPS/D-GalN)体外诱导肝细胞损伤模型的建立和评价

作者:

何佳1, 刘根玉2, 张耀林2, 张军1, 王庆阳2*(1河南大学抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室, 河南 开封 475004; 2军事医学研究院军事认知与脑科学研究所, 北京 100850)

出版年,卷期:

2021 第(37)卷 第(6)期 起止页码 495-500 页

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摘要:

目的 建立脂多糖/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)体外诱导肝细胞损伤模型。方法 体外培养小鼠原代肝细胞,  待其稳定贴壁生长后,    加入(0.1、 0.5、 1、 5) ng/mL肿瘤坏死因子α(TNF-α)和5 mg/mL D-GalN进行处理,  全自动生化分析仪检测细胞上清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性反映肝细胞损伤。诱导骨髓来源巨噬细胞成熟,  通过 1 μg/mL LPS刺激巨噬细胞产生TNF-α;   巨噬细胞培养上清联合5 mg/mL D-GalN或50 ng/mL放线菌素D(ActD)处理原代肝细胞24 h,  检测ALT活性、 显微镜观察细胞损伤情况。原代肝细胞和骨髓来源巨噬细胞(BMDM)共培养,  LPS联合D-GalN或ActD对共培养体系处理24 h,  检测共培养细胞上清ALT活性、 显微镜观察细胞损伤情况。结果 TNF-α和D-GalN联合处理原代肝细胞,  细胞培养上清ALT活性升高,  表明肝细胞发生损伤。LPS刺激BMDM表达TNF-α明显增加,  BMDM上清联合D-GalN能引起肝细胞培养上清ALT活性升高和肝细胞皱缩、 破碎。肝细胞和BMDM共培养体系中,  LPS联合D-GalN能够引起肝细胞损伤;   但LPS联合ActD不能引起肝细胞损伤,  显微镜观察发现巨噬细胞大量变圆、 皱缩,  提示巨噬细胞早于肝细胞发生死亡。结论 LPS/D-GalN能在体外诱导肝细胞损伤;   在利用BMDM和原代肝细胞共培养体系评价损伤效应时,  应当用D-GalN而不是ActD作为转录抑制剂。