细胞与分子免疫学杂志

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杨絮热休克蛋白70(HSP70)结构域蛋白的生物信息学分析、原核表达及生物学活性鉴定

作者:

郭伟1, 2, 湛孝东2, 蒋峰2, 席贻龙1*(1安徽师范大学生态与环境学院, 2皖南医学院医学寄生虫学教研室, 安徽 芜湖 241002)

出版年,卷期:

2021 第(37)卷 第(8)期 起止页码 710-715 页

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摘要:

目的 揭示杨絮热休克蛋白70(HSP70)结构域蛋白生物信息学特征, 并探索该类蛋白外源表达方法及生物学活性。方法 通过生物信息学软件对已获得的3个含HSP70结构域蛋白的理化性质进行分析, 利用免疫表位数据库和分析资源(IEDB)对该类蛋白的T、B细胞表位进行预测;  根据Uniprot数据库提供的氨基酸序列合成相关基因并克隆入pET28a(+)质粒进行原核表达, 采用SDS-PAGE检测蛋白表达, 表达产物经镍柱纯化后行Western blot鉴定目的蛋白;  蛋白浓度定量试剂盒检测蛋白浓度后, 分别以鉴定出的目的蛋白为抗原制备BALB/c小鼠哮喘模型, ELISA检测小鼠血清中IgE抗体浓度。结果 经生物信息学分析B9N9W6、B9GX02及A0A2K2AYN8蛋白相对分子质量(Mr)分别为71 900、94 600和75 200, 均为亲水性蛋白且稳定性较好;  经在线预测, 共鉴定出3种蛋白的高亲和力T细胞表位13个, B细胞表位14个;  SDS-PAGE显示, B9N9W6蛋白、B9GX02蛋白及A0A2K2AYN8蛋白分别在约72 000、95 000和75 000处出现特异性条带, Western blot 法也在相应位置出现特异性条带;  ELISA检测显示, 提取液组和A0A2K2AYN8组IgE表达水平高于PBS组;  同A0A2K2AYN8组比较, B9N9W6组及B9GX02组IgE浓度显著增高。结论 杨絮HSP70结构域蛋白A0A2K2AYN8、B9GX02及B9N9W6均可原核表达, 为可溶性蛋白, 且具有生成IgE的生物活性。