细胞与分子免疫学杂志

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组蛋白去乙酰化酶抑制剂tubastatin A促进嗜肺军团菌感染RAW264.7细胞自噬的机制

作者:

杨晓辰1, 曹秀琴2, 盛琳琳1, 杨志伟1*(宁夏医科大学: 1基础医学院病原生物学与免疫学系, 2生育力保持省部级共建教育部重点实验室, 宁夏 银川 750004)

出版年,卷期:

2021 第(37)卷 第(8)期 起止页码 693-701 页

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摘要:

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)在嗜肺军团菌干扰巨噬细胞自噬中的作用及机制。方法 采用(10、 5、 2.5)μmol/L tubastatin A (TubA)处理RAW264.7巨噬细胞, CCK-8法检测RAW264.7巨噬细胞的增殖活性确定TubA的半数抑制浓度(IC50)。建立嗜肺军团菌感染RAW264.7巨噬细胞感染模型, 实验分为无TubA组(每组设细胞对照组、 灭活菌组、 活菌组),  (10、 5、 2.5)μmol/L TubA处理组(每组均设细胞对照组、 灭活菌组、 活菌组)。嗜肺军团菌感染6、 12、 24、 48 h, 收集各组细胞。细菌增殖实验检测嗜肺军团菌在RAW264.7巨噬细胞内增殖的情况; pmCherry-C1-EGFP-LC3B 质粒转染RAW264.7小鼠巨噬细胞检测各组内自噬流变化; 实时定量PCR和Western blot法检测组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)、 P62、 微管相关蛋白1轻链3(LC3)、 α微管蛋白(α-tubulin)、 含缬酪肽蛋白(p97/VCP)、 热休克蛋白90(HSP90)、 HSP70、 热休克转录因子1(HSF1)和纤维型肌动蛋白(F-actin)的mRNA 及蛋白表达水平。结果 TubA的IC50为50 μmol/L。与RAW264.7细胞正常对照组相比, 加入TubA后, 嗜肺军团菌在小鼠巨噬细胞内增殖明显减少。在无HDAC6抑制剂组中, 与正常对照组相比, 活菌组比灭活菌组对自噬流的抑制作用更强。在HDAC6抑制剂TubA组中, 活菌组的绿色荧光亮点均减少, 自噬流增加。嗜肺军团菌的灭活菌和活菌分别作用于RAW264.7巨噬细胞6、 12、 24、 48 h, 与正常对照RAW264.7细胞相比, TubA嗜肺军团菌干扰组HDAC6、 α-tubulin、 p97/VCP、 P62 mRNA和蛋白表达均降低。结论 嗜肺军团菌干扰RAW264.7 巨噬细胞自噬与HDAC6/P62/LC3B和HDAC6/p97/HSF1信号通路有关。