细胞与分子免疫学杂志

过刊目录

当前位置:首页>过刊目录>2021

利用胸腺类器官体外诱导小鼠T淋巴细胞分化

作者:

宫茂源, 傅国, 舒逸, 朱丹, 蒋婷婷, 王皓飚, 柳梓杨, 苏虹宇, 邹琳*(重庆医科大学附属儿童医院临床分子医学中心, 儿童发育疾病研究教育部重点实验室, 国家儿童健康与疾病临床医学研究中心(重庆), 儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地, 重庆市干细胞治疗工程技术研究中心, 重庆 400014)

出版年,卷期:

2021 第(37)卷 第(8)期 起止页码 679-686 页

附件类型大小:

()

摘要:

目的 体外构建胸腺类器官,  模拟胸腺组织三维结构,  诱导多种来源小鼠造血干祖细胞(HSPC)向T细胞分化。方法 构建表达小鼠Delta 样经典缺刻基因配体 1(DLL1)及绿色荧光蛋白(GFP)的逆转录病毒载体;   通过逆转录病毒感染OP9小鼠骨髓间充质细胞,  构建OP9-DLL1细胞系;   实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测OP9-DLL1细胞DLL1的mRNA和蛋白表达,  免疫荧光细胞化学染色检测OP9-DLL1细胞DLL1的表达和分布;   提取C57BL/6小鼠E13.5胎肝HSPC及骨髓HSPC,  分别与OP9-DLL1细胞按适当比例混合后离心压实,  置于气液交面培养;   利用荧光显微镜观察胸腺类器官生长,  流式细胞术检测T细胞表面CD3、 CD4、 CD8、 CD25、 CD44、 CD45、 CD117、 T细胞受体β(TCRβ)表达,  免疫荧光组织化学染色观察造血细胞在胸腺类器官的分布。结果 成功构建表达小鼠DLL1及GFP的逆转录病毒载体,  逆转录病毒感染OP9细胞后,  通过GFP筛选获得OP9-DLL1细胞,  OP9-DLL1细胞DLL1 mRNA和DLL1蛋白表达明显增加,  DLL1蛋白表达于OP9-DLL1细胞膜。诱导培养40 d内,  胸腺类器官状态良好且体积逐渐增大。胸腺类器官诱导T细胞程序性分化,  HSPC分化为CD3+ T细胞。结论 通过OP9-DLL1细胞成功构建胸腺类器官,  体外诱导多种来源小鼠HSPC向T细胞分化。