细胞与分子免疫学杂志

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尿石素A(urolithin A)通过激活Nrf2通路和自噬抑制高脂诱导的肝细胞炎症反应及氧化应激

作者:

殷草草, 王玥, 彭越, 张荣强, 孙娜, 史传道*, 刘启玲*(陕西中医药大学公共卫生学院, 陕西 西安 712046)

出版年,卷期:

2021 第(37)卷 第(11)期 起止页码 973-980 页

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摘要:

目的 研究尿石素A(UA)对高脂诱导的肝细胞炎症以及脂肪堆积的作用及机制。方法 采用核因子E2相关因子2(Nrf2)短发夹RNA(shRNA)慢病毒感染, 建立稳定敲减Nrf2的L02肝细胞系。空载体对照细胞及敲低Nrf2的L02细胞给予游离脂肪酸(FFA)建立高脂细胞模型、 BODIPY493/503染色检测细胞内脂肪沉积情况, 在此基础上给与UA处理。分为对照组、 0.6 mmol/L FFA处理组、 0.6 mmol/L FFA联合10 μmol/L UA处理组、 0.6 mmol/L FFA联合20 μmol/L UA处理组, 均处理48 h。甘油三酯检测试剂盒检测细胞内甘油三酯(TG)水平, ELISA检测细胞上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及白细胞介素6(IL-6)水平; 采用二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色检测细胞内活性氧(ROS)水平; 采用试剂盒检测细胞内丙二醛(MDA)水平、 总超氧化物歧化酶(SOD)以及过氧化氢酶(CAT)活性; 实时定量PCR检测SOD2和CAT的mRNA水平, Western blot法检测SOD2、 CAT、 Nrf2以及P62、 微管相关蛋白轻链3(LC3)蛋白水平。采用红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-LC3(RFP-GFP-LC3)腺病毒感染细胞, 检测自噬通量水平。结果 FFA增加L02细胞内TNF-α、 IL-6水平以及TG含量和细胞内脂肪沉积, 细胞内MDA和ROS水平增加, SOD2、 CAT、 Nrf2的mRNA和蛋白表达降低; FFA处理降低细胞LC3-Ⅱ水平, 增加P62水平, 阻断自噬通量。UA处理可逆转FFA以上作用, 敲低Nrf2能够逆转UA的上述作用。结论 UA通过激活Nrf2介导的细胞抗氧化以及自噬通路, 缓解高脂诱导的肝细胞炎症反应和氧化应激。