摘要：

目的 通过导入人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因构建永生化人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC-hTERT）,  探索永生化HUVEC对汉滩病毒（HTNV）感染效率及细胞固有免疫调控的影响,  评价HUVEC-hTERT作为研究HTNV细胞模型的潜能。方法 将hTERT基因克隆入慢病毒载体,  构建pCDH-CMV-hTERT-EF1-puro质粒后包装慢病毒并感染HUVEC;  嘌呤霉素筛选稳定表达hTERT基因的HUVEC命名为HUVEC-hTERT;  利用显微镜观察和免疫荧光细胞化学染色法对HUVEC-hTERT的形态及内皮细胞标志分子人血管性假血友病因子（vWF）、 CD31和血管内皮细胞钙黏蛋白（VE-cadherin）进行鉴定;  利用免疫荧光法检测HTNV感染后核衣壳蛋白（NP）阳性细胞百分比,  观察HTNV对HUVEC和HUVEC-hTERT的感染效率差异;  利用实时定量PCR和Western blot法分别检测感染HTNV后,  病毒基因组小片段（S）及其编码的NP在不同时间点的复制水平,  验证HTNV在细胞中的增殖效率;  利用实时定量PCR检测细胞β干扰素（IFN-β）、 黏病毒抗性蛋白A（MxA）、 MxB、 干扰素诱导蛋白2（IFIT2）、 干扰素诱导跨膜蛋白3（IFITM3）及炎症因子环加氧酶2（COX2）、 细胞间黏附因子（ICAM）和CC趋化因子配体5（CCL5）的mRNA水平并利用Western blot法检测IFIT2、 IFITM3和MxA的蛋白水平,  观察细胞固有免疫对HTNV的反应是否一致。利用Western blot、 实时定量PCR检测感染HTNV后细胞上述分子的表达情况,  观察永生化后细胞固有免疫对HTNV 的反应是否一致。结果 成功筛选出永生化细胞系HUVEC-hTERT,  鉴定出其与HUVEC具有相同的表型并表达内皮细胞标志分子vWF、 CD31、 VE-cadherin;  HUVEC-hTERT和HUVEC均可被HTNV感染且感染效率基本相同;  在HTNV感染过程中,  HUVEC-hTERT 的固有免疫分子,  如IFN-β、 MxA、 MxB、 IFIT2、 IFITM3、 COX2、 ICAM及CCL5的表达情况与HUVEC相同,  表明HUVEC-hTERT固有免疫调控未发生改变。结论 HUVEC-hTERT可在一定程度上代替原代HUVEC用于HTNV感染致固有免疫应答调控的研究。